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液相色谱仪应用中常见故障及解决方法

点击次数:1194 发布时间:2016-11-23

  1 液相色谱仪系统
  液相色谱仪重要由贮液瓶¶••⊿泵¶••⊿进样器¶••⊿柱子¶••⊿柱温箱¶••⊿检测器¶••⊿数据处理系统组成••。对于全部系统而言,柱子¶••⊿泵和检测器是核心部件同时也是易出问题的重要部位••。
  2 常见问题及解决方法
  液相作为一种高精密仪器,如果在应用过程中不按照正确操作的话,就容易导致一些问题••。其中zui常见的就是柱压问题¶••⊿漂移问题¶••⊿峰型异常问题••。
  2.1 柱压问题 柱压问题是应用液相色谱过程中需要密切注意的处所,柱压的稳固与色谱图峰形的好坏¶••⊿柱效¶••⊿分别效果及保存时间等密切相干••。所谓柱压稳固并不是指压力值稳固于一个恒定值而是指压力波动领域在50PSI(3.3 Bar)之间(在应用梯度洗脱时,柱压安稳缓慢的变更是容许的)••。压力过高¶••⊿过低都属于柱压问题••。
  2.1.1 压力过高 这是液相在应用中zui常见的问题,指的是压力突然升高,一般都是由于流路中有堵塞的原因••。此时,我们应当分段进行检查••。
  (1).首先断开真空泵的入口处,此时PEEK管里充满液体,使PEEK管低于溶剂瓶,看液体是否自由滴下,如果液体不滴或缓慢滴下,则是溶剂过滤头堵塞••。处理方法:用30%的硝酸浸泡半个小时,在用超纯水冲洗干净••。如果液体自由滴下,溶剂过滤头正常,在检查;
  (2).打开Purge阀,使流动相不经过柱子,如果压力没有明显降落,则是过滤白头堵塞••。处理方法:将过滤白头取出,用10%的异丙醇超声半个小时••。如果压力降至100PSI (6.7 Bar)以下,过滤白头正常,在检查;
  (3).把色谱柱出口端取下,如果压力不降落,则是柱子堵塞••。处理方法:如果是缓冲盐堵塞,则用95%的水冲至压力正常••。如果是一些强保存的物质导致堵塞,则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常••。假如按上面的方法长时间冲洗压力都不降落,则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上,用流动相冲洗柱子••。这时,如果柱压仍不降落,只有换柱子入口筛板,但一旦操作不甚,很容易造成柱效降落,所以尽量少用••。
  2.1.1 压力过低 压力过低的现象一般是由于系统泄漏,处理方法:寻找各个接口处,特别是色谱柱两端的接口,把泄漏的处所旋紧即可••。当然还有一个原因就是泵里进了空气,但此时表现的往往是压力不稳,忽高忽低,更严重一点会导致泵无法吸上液体••。处理方法:打开Purge阀,用3~5ml/min的流速冲洗,如果不行,则要用专用针筒在排空阀处借住外力将气泡吸出••。
  2.2.漂移问题 重要包含基线漂移和保存时间漂移••。
  2.2.1基线漂移     一般说来,机器刚起动时,基线容易漂移,大概要半个小时的平衡时间,如果你用了缓冲溶液或缓冲盐,还有就是在低波长下(220nm)平衡时间相对会比较长,但如果你在实验过程中创造基线漂移,则你要考虑下面的原因:
  1¶••⊿柱温波动••。解决方法:把持好柱子和流动相的温度,检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱••。
  2¶••⊿流通池被污染或有气体••。 解决方法:用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池(zui好断开柱子)••。如有需要,可以用1N的硝酸(不要用盐酸)••。
  3¶••⊿紫外灯能量不足••。解决方法:调换新的紫外灯
  4¶••⊿流动相污染¶••⊿变质或由低品德溶剂配成••。解决方法:检查流动相的组成,应用高品德的化学试剂及HPLC级的溶剂••。
  5¶••⊿样品中有强保存的物质(高K’值)以馒头峰样被洗脱出,从而表现出一个逐步升高的基线••。解决方法:应用掩护柱,如有必要,在进样之间••。在分析过程中,定期用强溶剂冲洗柱子••。
  6¶••⊿检测器没有设定在zui大吸收波优点••。解决方法:将波长调剂至zui大吸收波优点
  7¶••⊿流动相的PH值没有调节好••。解决方法:加适量的酸或碱调至zui佳PH值
  2.2.2保存时间漂移     保存时间重现是液相性能好坏的一个重要标记,同一种东西,两次的保存时间相差不要超过15s,超过了半分钟可看做保存时间漂移,就无法进行定性,你要考虑以下原因:
  1¶••⊿温控不当••。解决方法:调好柱温,检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱••。
  2¶••⊿流动相比例变更••。解决方法:检查四元泵的比例阀是否有故障
  3¶••⊿色谱柱没有平衡••。解决方法:在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱
  4¶••⊿流速变更••。解决方法:重新设定流速
  5¶••⊿泵中有气泡••。解决方法:¶••⊿从泵中除去气泡
  2.3 峰型异常问题 峰型问题是液相的重要问题,在做液相过程中,我们就是要变换不同的条件来改良不好的峰型,对于各种各样的异常峰,要差别看待,从重要问题出发,一个一个加以解决••。
  1¶••⊿色谱图中未出峰••。解决方法:系统未进样或样品分解;泵未输液或流动相应用不正确;检测器设置不正确;针对以上情况成因作相应调剂即可••。
  2¶••⊿一个峰或几个峰是负峰••。解决方法:流动相吸收本底高;进样过程中进入空气;样品组分的吸收低于流动相••。
  3¶••⊿所有峰均为负峰••。解决方法:信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒;光学装置尚未达到平衡••。
  4¶••⊿所有峰均为宽峰••。解决方法:系统未达到平衡;溶解样品的溶剂极性比流动相差很多;色谱柱尺寸及类型选择不正确;色谱柱或掩护柱被污染或柱效降低;温度变更造成的影响••。 ¶••⊿
  5¶••⊿所出峰比预想的小••。解决方法:样品黏度过大;进样品故障或进样体积误差;检测器设置不正确.定量环体积不正确;检测池污染;检测器灯涌现问题••。
  6¶••⊿涌现双峰或肩峰••。解决方法:进样量过大;样品浓度过高;掩护柱或色谱柱柱头堵塞;掩护拄或色谱柱污染或失效;柱塌陷或形成短通道••。
  7¶••⊿前伸峰••。解决方法:进样量或样品浓度高;溶解样品的溶剂较流动相极性强;掩护柱或色谱柱污染或失效••。
  8¶••⊿拖尾峰••。解决方法:柱超载,降低样品量;增长柱直径采用较高容量的固定相;峰干扰,对样品进行干净过滤;调剂流动相;硅羟基作用,参加三乙胺,用碱致钝化柱增长缓冲液或盐的浓度降低流动相pH值;柱内烧结不锈钢失效,调换烧结不锈钢;加在线过滤器,对样品进行过滤;逝世体积或柱外体积过大,将连接点降至zui低;尽可能应用内径较细的连吸收;柱效降落,调换柱子;采用掩护柱,对柱子进行再生••。
  9¶••⊿涌现平头峰••。解决方法:检测器设置不正确;进样体积太大或样品浓度太高••。
  10¶••⊿涌现鬼峰••。解决方法:进样阀残余峰,在每次进完样后用充分的时间来平衡和清洗系统;样品中存在未知物,改良样品的预处理;流动相污染,调换新流动相,尽可能现配现用,隔夜的流动相再次应用时要过滤;尽可能应用HPLC级试剂;流路中有小的气泡,打开Purge阀,加大流速排除••。
  3 结语
  以上内容只是对液相色谱中涌现的常见的问题进行了分析,在故障排除时要遵守以下原则:一次只转变一个因素,断定假定因素与问题之间的;如果通过调换组件来排查故障时要注意将拆下的完好组件装回原位,避免糟蹋;这是成功进行故障排除的要害••。总之,在应用液相色谱时必定要注意样品的前处理与仪器的正确操作和保养••。

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