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液相色谱仪操作(二)

点击次数:1227 发布时间:2016-11-24

   液相色谱仪操作

  二¶••⊿过滤

极速牛牛  任何颗粒物进入液相色谱系统后都会在柱子入口端被筛板挡住,zui后的成果是将柱子堵塞,表现出的特点是系统压力增长并使色谱峰变形••。因此,要采用各种预防措施,包含操作步骤和商品仪器自身的各种过滤设计,努力防止或减少颗粒物进入HPLC系统中,从而延伸仪器和色谱柱的应用寿命,并进步数据的可靠性••。在HPLC系统中,颗粒物的重要起源有三个道路:流动相¶••⊿被测样品和仪器系统部件的磨损物••。

  1¶••⊿流动相

极速牛牛  如果流动相均由 液相色谱 级溶剂组成,流动相没有必要过滤••。这是因为液相色谱级的有机溶剂,例如乙腈¶••⊿甲醇等,在制作的工艺过程中都已经过了0.2μm微孔滤膜过滤••。同样的,无论你是买的HPLC级的水还是在实验室应用超纯水净化系统制备的水,zui后一步也是通过0.2μm微孔滤膜••。然而,如果有任何一种缓冲液中参加了固体物,例如磷酸盐,流动相过滤将是必要的一个步骤••。虽然缓冲盐可能是可溶解的¶••⊿高纯的,但它还是可能含有颗粒物质,例如在盖试剂瓶的塑料内盖时,塑料瓶盖子与瓶口边沿挤压就会产生塑料颗粒••。在这种情况下,添加的一种固体物可能完整溶解了,但是少量杂质颗粒存在于流动相中成为残渣••。

  流动相通过0.45 μm微孔滤膜过滤对于从流动相中除去所有颗粒物是一个有效方法••。0.2μm微孔滤膜也可以用,但是它们就这个利用而言并不比0.45μm微孔滤膜更有效,而且它的过滤速度会更慢,特别是当实验室应用的试剂和水的质量不太好时••。建议实验室在编写制定他们流动相制备标准操作程序(SOPs)时规定,可以借鉴国际上同类实验室的规定,即:

  流动相制备仅采用HPLC级液体时不需要过滤,反之所有流动相组成在应用前必须过滤••。

  在连接储液瓶和泵的输液管的末端入口采用下沉式过滤器(常见材质有熔融玻璃砂芯滤板和微孔金属的两种)也是很重要的••。这个过滤器的规格为≥10μm的微孔物质,所以它不能代替流动相过滤步骤,但是它能除去系统中的尘土并保证储液瓶¶••⊿输液管应用的可靠性••。

  2¶••⊿被测样品

  液相系统中的第二个颗粒物起源是被测样品••。一些实验室在将他们的样品放置在主动进样器盘(或手动进样)以前,所有样品都先通过一个0.45μm针筒式过滤器过滤••。这是一个有效除去被测样品中颗粒物的方法••。但是这个过程也有一点需要关注:你应用了针筒式过滤器就不可能100%得到通过过滤器的被测样品,总会有或多或少的丧失••。丧失来自这样几方面:过滤器滤膜的吸附¶••⊿过滤器滤出的颗粒物上的吸附¶••⊿针筒式滤膜过滤器与针筒连接处的渗漏等••。如果有丧失,过滤后液体中被测物的含量或浓度与原基础样液的含量或浓度还雷同吗?这个问题一般需要通过实验确认••。确认这步是要增长工作量和费用的••。过滤器的应用是一种耗费,每个过滤器的价格从几元到十几元••。但在做食品中残留物分析时,由于基质大多比较复杂,所以过滤这步已成为不可或缺的一步••。在实际分析工作中,一般检测每一组样品会带一个外标¶••⊿一个添加回收或是质控样品,所以,只要zui终检测时得到的信噪比能满足检出限请求,可将这步视为系统误差而疏忽••。

极速牛牛  3¶••⊿仪器系统部件的磨损物

  zui后,在液相系统中颗粒物的另一个重要起源是输液泵密封垫和进样阀旋转轴的磨损••。关于输液泵密封垫的磨损调换有两种不同建议••。

  *种建议认为,在一般实验室中输液泵密封垫通常应用寿命为六个月到一年,因此建议半年或一年调换这些密封垫,实验室应基于上述观点制定定期预防性掩护打算••。该观点认为:与输液泵密封垫颗粒堵塞柱子而调换新柱子的费用相比,调换密封垫的费用低些••。一些输液泵有玻璃砂芯或筛网,可在流路中滤掉从泵密封垫磨损下来的颗粒物,防止这些颗粒物随流动相流至柱头••。若有这种装置应查阅输液泵操作手册,查看推荐的这种过滤器清洗或调换的间隔••。

极速牛牛  另一种建议则认为,原装密封垫的密封效果zui好,调换以后容易引起流动相渗漏••。所以,只要不漏液就不要轻易调换密封垫••。

  两种说法都有其道理,具体如何操作,建议与仪器公司工程师沟通,各公司的仪器还是有些不同的••。

  主动进样器旋转轴的密封随着应用时间也会磨损,但是在我的经验中,即便是高负荷的运转旋转轴密封垫也可以应用几年••。如果你的主动进样器系统有计数进样阀转动次数的功效,你可以设定一个警铃当预设阀转动次数已达到时提示你••。曾有一种说法,进样器zui多转动20,000次,这仅仅是进样10000个;但这似乎不是实验室涉及的惯例样品分析应用寿命,它们的实际应用寿命会更长••。旋转轴密封磨损后会渗液,比较明显的特点是同一样品多次进样后,峰面积值差别比较大(RSD>5%)••。当然,输液泵的密封垫和旋转轴的密封垫磨损将增长更多研磨物在流动相中,加速对这些部件的损伤••。此外,如果你日常运行的流动相有缓冲盐,如磷酸缓冲盐,密封垫的磨损会更快••。

  无论颗粒物源于何物,实验时都要将其除去••。推荐在HPLC系统中采用一个0••。45或0••。5μm的在线多孔过滤器,接在主动进样器和柱子之间,即使已应用了掩护柱••。这个在线过滤器将成为挡板代替柱头的滤板,而且如采用一个玻璃砂芯滤板,既便宜,调换又方便(几分钟就可调换)••。若采用在线过滤,HPLC系统检测每批样品开端前记载下压力值,当压力上升必定值,例如25%或增长500psi,应当调换玻璃砂芯滤板了,调换以后冲洗几分钟系统将恢复到本来的压力值••。

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