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液相色谱仪的掩护与保养知识

点击次数:1171 发布时间:2017-11-11

 
液相色谱仪是属于易学难用的仪器,特别讲究“正确应用”和经验••。
液相工作者接触zui多的是流动相,也就是流动相,是造成液相色谱各种问题的zui重要源头••。
液相色谱仪zui常见的故障一是堵,二是漏••。下面我们来谈一下“堵”的情况••。(注:流动相以甲醇为例,色谱柱以C18为例)
 
“堵”的表现现象就是柱压异常升高,直接原因就是流路不畅••。堵塞的重要地位就是在色谱柱的前端,zui重要原因就是流动相里有杂质,杂质的重要起源就是细菌••。
 
“堵”的原因之一:配制流动相时细菌污染
 
首先,我们要认识到,一般的国产甲醇其实不需要额外过滤处理,直接应用没有问题••。即使是有些固态微粒杂质,也能在液相流路系统zui前端的过滤头上排除,真正容易引起问题的,是水中的细菌••。
新制备的纯水在室内放置几天就会长菌,而这些细菌虽然肉眼不可见,却足以堵塞柱填料颗粒的空隙,造成柱子很快报废••。这就是在配制流动相时造成的细菌污染的原因,解决它的方法很简略,就是确保水的可靠性••。这里有两种方法推荐:
(1)zui理想的方法当然是购置实验室专用纯水机,既方便又可靠,质量也放心••。*的毛病就是价格不菲••。
(2)成箱购置市售品牌纯净水,如,500mL一支的怡宝或娃哈哈,这些水的质量足以搪塞液相色谱的请求••。先随机抽取一支做一下细菌平板实验,待菌落数合格方可应用••。这样每次只要单独开一支即可,也很方便••。每次成本2元左右••。
※这里特别指出一个细节:在绝大多数书本上,凡谈到配制流动相都谈判到zui后有一个过滤的步骤••。但是从我们长期应用的实际效果来说,只要能保证水的质量,这一步完整可以也应当去除••。
原因有以下三点:
(1)流动相过滤在理论上有利益,但是,实际操作时由于不可能做到专瓶专用,反而容易造成的交叉污染,对于配比复杂的流动相影响更大••。
(2)流动相过滤在经济成本上不划算••。买一套过滤装置要6000多元,且过滤器公认是比较容易损坏的设备••。zui重要是过滤片的成本太高,一片就要几十元••。按一般液相柱的正常应用寿命盘算,过滤片的成本会远远高于色谱柱的成本••。
(3)流动相过滤对于工作效率成本不划算••。应用溶剂过滤器有一个预清洗¶••⊿设备¶••⊿应用¶••⊿用后清洗,晾干的过程,至少也有一个小时的时间••。这个成本也不能疏忽••。
(4)在实际工作未创造流动相不过滤会对柱寿命有任何影响••。我们起码有6年时间没有做过流动相过滤的工作,但是和国内同行相比较,在同等应用强度下我们的柱寿命是比较长的••。
 
“堵”的原因之二:应用流动相时的细菌污染••。
 
指的是:
流动相刚开端没有长菌,在应用时却产生了细菌污染••。这重要是在应用多元液相色谱仪时的一种不良应用习惯造成的••。
举zui简略的例子:
50%的甲醇水流动相,有两种应用方法••。一种方法是在上机前就配好混杂在一起,另一种方法是在流路A放纯甲醇,流路B放纯水••。
从单纯实验效果来说,后一种有明显的优点:首先是简略,不需要实验者另个盘算配比混杂,其次就是比例正确,能得到保存时间重复性极好的实验效果••。
但是,它有一个致命的缺点,就是纯水在流动相瓶中几天时间就会长细菌(很多情况下不仅仅用纯水作流动相,而是用缓冲盐溶液,本身就是肥料,细菌长得更迅速),一旦有细菌柱子就坏得很快••。所以这种方法请求操作人员每次实验都要用新制备的纯水,更请求在每次实验后把水相换掉,换成甲醇冲洗干净,这一点在实际工作中很多人意识不强,就是意识到了但多次应用中总有一两次会遗漏,但是往往这一两次就足以产生致命的影响••。因为液相色谱柱的堵塞是不可逆的••。
所以,宁可就义小小的保存时间的重复性,也不要用纯水溶液作为流动相的一组••。从实际实验效果来说,我建议用10%的甲醇水代替纯水溶液(以前我做过不同比例甲醇水的细菌总数实验,在5%就基础可以抑菌,在10%及以上就可以完整杀菌了),这样可以有效排除长细菌的隐患,既可作流动相,也可冲柱••。就算是在配制流动相时会盘算得麻烦一些,但是一次麻烦,毕生受益••。
 
“堵”的原因之三:不适当操作••。
 
常见问题的有以下几种:
(1)在调换零件时选择的型号有误,接口不是很匹配,在拧紧的时候产生变形而使得管路堵塞••。
(2)样品处理液净化得不干净,长期会在六通阀和柱之间形成阻塞不畅••。
(3)在应用手动六通阀时,有些人可能由于手劲小的原因,转动的不到位,于是造成流路形成了逝世堵,压力快速升高超过警惕值••。
(4)在应用金属管路作出废液管时,应当注意zui好废液瓶中先放一些水,并把废液管的出口端放在液面下••。如果位于在液相上且实验应用较高浓度的缓冲盐溶液,在停机时可能在出口端结晶成块并造成堵塞••。这种情况不常见,但却的确产生过••。
“堵”的原因讲了不少,现介绍查堵的方法••。
在产生“堵”的现象后,就需要找出原因,重要是什么地位产生了“堵”••。注意,绝大多数情况下,全部系统只会有一个处所产生堵塞••。
查堵的方法是从尾向前逆向分段拆开,仔细视察压力数值,如果某一个部件(柱子除外)装上和拆下时的压力差别很大,可发展变更断定••。至于柱的堵塞,可以通过换同样规格的柱的压力是否一致来断定••。

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